DIO2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402262

Panoramica

DIO2 codifica la deiodinasi di tipo II delle iodotironine, una selenoenzima associata al reticolo endoplasmatico che catalizza la deiodinazione dell’anello esterno della tiroxina (T4) per generare l’ormone attivo triiodotironina (T3). Controllando la disponibilità intracellulare di T3, DIO2 modella programmi trascrizionali dipendenti dai recettori degli ormoni tiroidei che regolano il metabolismo energetico, la termogenesi, l’omeostasi dei lipidi e del glucosio e i processi di differenziamento nei diversi contesti tissutali. L’attività di DIO2 è integrata con la biologia redox e del selenio, inclusi la sintesi delle selenoproteine e le risposte allo stress ossidativo che influenzano la stabilità e il turnover dell’enzima. Alterazioni dell’espressione o della funzione di DIO2 sono state associate a fenotipi metabolici e a condizioni fisiopatologiche sensibili agli ormoni tiroidei, a supporto del suo studio nella regolazione endocrina, nei meccanismi legati all’obesità e nella segnalazione tissutale specifica degli ormoni tiroidei.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DIO2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DIO2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DIO2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DIO2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DIO2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DIO2 per lo studio della segnalazione di DIO2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DIO2 critici per la funzione di DIO2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DIO2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DIO2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DIO2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DIO2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DIO2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DIO2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DIO2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DIO2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.