DIO1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420002

Panoramica

Il gene murino *Dio1* codifica la deiodinasi 1 delle iodotironine (DIO1), un selenoenzima che catalizza la deiodinazione sull’anello esterno e interno degli ormoni tiroidei, contribuendo alla conversione periferica della tiroxina (T4) nella triiodotironina (T3) bioattiva e alla clearance degli ormoni. L’attività di DIO1 sostiene l’omeostasi endocrina e metabolica modulando la disponibilità intra-cellulare e circolante degli ormoni tiroidei, influenzando così i programmi trascrizionali controllati dai recettori degli ormoni tiroidei. *Dio1* è ampiamente studiato nel contesto del metabolismo epatico e renale degli ormoni tiroidei, della biologia del selenio e della funzione enzimatica dipendente dal redox. Alterazioni nell’espressione o nell’attività delle deiodinasi sono state associate a una deregolazione della segnalazione degli ormoni tiroidei in condizioni metaboliche e infiammatorie, motivando studi meccanicistici delle vie dipendenti da *Dio1* in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DIO1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Dio1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Dio1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Dio1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DIO1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Dio1 per lo studio della segnalazione di DIO1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Dio1 critici per la funzione di DIO1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Dio1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DIO1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal DIO1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Dio1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DIO1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR DIO1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Dio1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Dio1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.