DICE1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421932

Panoramica

Ints6 codifica DICE1, un componente conservato del complesso Integrator che si associa all’RNA polimerasi II per coordinare la formazione dell’estremità 3′ dei piccoli RNA nucleari (snRNA) e un controllo trascrizionale più ampio. Attraverso i suoi ruoli nella maturazione dell’RNA e nella regolazione della trascrizione, DICE1 influenza la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e programmi di espressione genica su scala genomica. Alterazioni dell’attività di INTS6/DICE1 sono state collegate a un controllo della crescita compromesso e a contesti di segnalazione oncogenica, rendendolo rilevante per lo studio dei meccanismi di soppressione tumorale e dello stress trascrizionale. Nei modelli murini, la perturbazione di Ints6 è utile per analizzare le vie dipendenti da Integrator che collegano l’elaborazione dell’RNA a esiti su cromatina e segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DICE1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ints6 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ints6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ints6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DICE1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ints6 per lo studio della segnalazione di DICE1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ints6 critici per la funzione di DICE1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ints6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DICE1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal DICE1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ints6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DICE1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR DICE1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ints6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ints6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.