DGUOK Plasmide Double Nickase (h): sc-407916-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DGUOK Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DGUOK Double Nickase Plasmid (h) e il DGUOK Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DGUOK. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DGUOK Antibody (H-3): sc-376267
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DGUOK Plasmide Double Nickase (h) | sc-407916-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DGUOK Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407916-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La deossiguanosina chinasi (DGUOK) è un enzima della matrice mitocondriale che fosforila la deossiguanosina e la deossiadenosina, fornendo precursori di deossiribonucleotidi necessari per la replicazione e la riparazione del DNA mitocondriale (mtDNA). Sostenendo pool bilanciati di dNTP all’interno dei mitocondri, DGUOK contribuisce a mantenere il numero di copie e l’integrità dell’mtDNA, collegando il metabolismo di recupero (salvage) dei nucleotidi alla capacità di fosforilazione ossidativa e alla biogenesi mitocondriale. L’alterazione dell’attività di DGUOK è associata a deplezione di mtDNA e a una compromissione della funzione della catena respiratoria, rendendolo rilevante per studi sulla manutenzione mitocondriale, sul metabolismo energetico e sulle risposte cellulari allo stress. DGUOK umano è pertanto comunemente studiato in modelli di disfunzione mitocondriale e di omeostasi dei nucleotidi.
DGUOK Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DGUOK nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DGUOK. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DGUOK. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DGUOK interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.