DGAT1 Plasmide Double Nickase (m): sc-419993-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DGAT1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DGAT1 Double Nickase Plasmid (m) e il DGAT1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Dgat1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DGAT1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-419993-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DGAT1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-419993-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Dgat1 codifica la diacilglicerolo O-aciltransferasi 1 (DGAT1), un enzima di membrana del reticolo endoplasmatico (RE) che catalizza l’ultimo passaggio obbligato della sintesi dei triacilgliceroli a partire da diacilglicerolo e acil-CoA degli acidi grassi. L’attività di DGAT1 sostiene la biogenesi delle gocce lipidiche, l’accumulo di lipidi neutri e la regolazione del flusso degli acidi grassi, collegandola al metabolismo dei glicerolipidi e a vie più ampie dell’omeostasi energetica. Nei tessuti metabolici, DGAT1 contribuisce a tamponare gli intermedi lipotossici convogliando gli acidi grassi nei trigliceridi, influenzando la sensibilità all’insulina, la segnalazione infiammatoria e le risposte cellulari allo stress. Un’alterazione della funzione di DGAT1 è quindi rilevante per modelli di obesità, steatosi epatica, dislipidemia e difetti nella gestione dei lipidi in intestino, tessuto adiposo e ghiandola mammaria.
DGAT1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Dgat1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Dgat1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Dgat1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Dgat1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.