Desmuslin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409241-ACT

SYNM codifica la desmuslina (sinemina), una grande proteina associata ai filamenti intermedi che si integra con la desmina e con altre reti del citoscheletro per stabilizzare l’architettura delle cellule muscolari e non muscolari. La desmuslina supporta l’allineamento dei sarcomeri, l’organizzazione delle adesioni focali e la meccanotrasduzione collegando i filamenti intermedi alle strutture di membrana e contrattili, influenzando così la forma cellulare, la migrazione e le risposte allo stress. Nei tessuti umani, l’espressione di SYNM è arricchita nel muscolo striato e contribuisce all’integrità dell’impalcatura miofibrillare e dei complessi di segnalazione citoscheletrica. La disregolazione della funzione di sinemina/desmuslina e le alterazioni della dinamica dei filamenti intermedi sono state associate a fenotipi miopatici e al rimodellamento del citoscheletro osservati in contesti di malattie del muscolo cardiaco e scheletrico, rendendo SYNM un nodo utile per lo studio delle vie di segnalazione strutturale.

Desmuslin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SYNM senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Desmuslin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SYNM nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SYNM, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Desmuslin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SYNM nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Desmuslin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Desmuslin nelle cellule tumorali con espressione di SYNM silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.