desmoplakin I/II Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430943

Panoramica

Il gene murino **Dsp** codifica la desmoplachina I/II, un citolinker fondamentale dei desmosomi che ancora i filamenti intermedi ai complessi desmosomiali cadherina–plakoglobina/plakofiline, sostenendo l’integrità tissutale sotto stress meccanico. La desmoplachina regola l’adesione cellula-cellula, l’organizzazione del citoscheletro e le reti di segnalazione giunzionale che coordinano l’architettura degli epiteli e del muscolo cardiaco. L’alterazione della funzione desmosomiale modifica la meccanotrasduzione e le proprietà di barriera, influenzando processi quali la differenziazione epidermica, la risposta alle ferite e l’accoppiamento tra cardiomiociti. La disfunzione di **Dsp** è ampiamente utilizzata come modello di patobiologia correlata ai desmosomi, includendo fenotipi di fragilità cutanea e difetti giunzionali associati a cardiomiopatia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO desmoplakin I/II (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Dsp in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Dsp insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Dsp a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina desmoplakin I/II.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Dsp per lo studio della segnalazione di desmoplakin I/II, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Dsp critici per la funzione di desmoplakin I/II
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Dsp per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal desmoplakin I/II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal desmoplakin I/II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Dsp. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal desmoplakin I/II Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR desmoplakin I/II (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Dsp per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Dsp definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.