densin-180 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403589-ACT

LRRC7 codifica densin-180, una proteina di scaffolding della densità postsinaptica, arricchita nelle sinapsi eccitatorie, dove contribuisce a organizzare complessi proteici che regolano l’architettura delle spine dendritiche e la segnalazione sinaptica. Densin-180 si associa a componenti di membrana e del citoscheletro e integra vie di segnalazione legate alla plasticità sinaptica, incluse interazioni che collegano i complessi associati ai recettori alle chinasi a valle e al rimodellamento dell’actina. Grazie al suo ruolo nel mantenimento dell’organizzazione postsinaptica e della connettività neuronale, LRRC7 viene studiato nel contesto dei meccanismi di malattie neuroevolutive e neuropsichiatriche, in cui struttura e segnalazione sinaptica risultano alterate. La modulazione sperimentale dell’espressione di LRRC7 supporta analisi meccanicistiche della maturazione sinaptica, della segnalazione dipendente dall’attività e della funzione di rete in modelli neuronali umani.

densin-180 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LRRC7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

densin-180 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LRRC7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LRRC7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di densin-180. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LRRC7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da densin-180 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via densin-180 nelle cellule tumorali con espressione di LRRC7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.