Delta-3 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-420011-LAC

Il gene murino **Dll3** codifica **Delta-3**, un ligando atipico di tipo Delta che modula la segnalazione di Notch durante lo sviluppo embrionale, con ruoli di primo piano nella somitogenesi, nella neurogenesi e nei programmi di differenziamento che dipendono da una comunicazione cellula–cellula accuratamente regolata. A differenza dei ligandi canonici attivatori, **DLL3** è spesso associato al traffico intracellulare e a una soppressione o regolazione fine, dipendente dal contesto, dell’output della via di Notch, influenzando le reti trascrizionali **HES/HEY** e l’impegno di linea. L’alterazione dell’attività di **Dll3** perturba la dinamica dell’orologio di segmentazione e il patterning vertebrale, collegandolo a fenotipi scheletrici congeniti e a disregolazioni dello sviluppo. Di conseguenza, **Dll3** è frequentemente studiato per comprendere la regolazione della via di Notch, la temporizzazione dello sviluppo e i circuiti trascrizionali che governano le decisioni sul destino cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale Delta-3 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Dll3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Delta-3 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Dll3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Delta-3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Dll3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.