Delta-3 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-420011-LAC

O Dll3 de camundongo codifica o Delta-3, um ligante atípico do tipo Delta que modula a sinalização Notch durante o desenvolvimento embrionário, com papéis proeminentes na somitogênese, na neurogênese e em programas de diferenciação que dependem de comunicação célula–célula precisa. Diferentemente dos ligantes canônicos ativadores, o DLL3 é frequentemente associado ao tráfego intracelular e à supressão ou ao ajuste dependente do contexto da saída da via Notch, influenciando redes transcricionais HES/HEY e o comprometimento de linhagem. A atividade de Dll3 quando desregulada perturba a dinâmica do “relógio” de segmentação e o padrão vertebral, ligando-o a fenótipos esqueléticos congênitos e a desregulação do desenvolvimento. Como resultado, o Dll3 é frequentemente estudado para compreender a regulação da via Notch, o timing do desenvolvimento e circuitos transcricionais que governam decisões de destino celular.

As Partículas de Ativação Lentivirais Delta-3 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Dll3 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Delta-3 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Dll3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Delta-3. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Dll3 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.