Delta-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420011

Panoramica

Dll3 codifica Delta-3, un ligando atipico di Notch che modula la segnalazione del recettore Notch durante lo sviluppo embrionale, in particolare nella somitogenesi e nella definizione del pattern antero-posteriore. Nel topo, DLL3 agisce principalmente nell’apparato di Golgi e nel reticolo endoplasmatico per influenzare l’output della via di Notch, intervenendo sul processamento del recettore e sulle interazioni tra ligandi, e plasmando programmi trascrizionali che governano le decisioni di destino cellulare. L’alterazione di Dll3 interrompe la segnalazione oscillatoria di Notch e la dinamica dell’orologio di segmentazione, causando difetti nel patterning delle vertebre e delle costole e offrendo un modello per le malformazioni congenite della colonna vertebrale. Poiché la segnalazione di Notch interagisce anche con differenziamento, proliferazione e omeostasi tissutale, gli studi di perdita di funzione di Dll3 sono utili per analizzare il crosstalk tra vie di segnalazione in contesti di sviluppo e rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Delta-3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Dll3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Dll3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Dll3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Delta-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Dll3 per lo studio della segnalazione di Delta-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Dll3 critici per la funzione di Delta-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Dll3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Delta-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Delta-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Dll3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Delta-3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Delta-3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Dll3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Dll3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.