Delta-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420011

Visão geral

Dll3 codifica a Delta-3, um ligante atípico de Notch que modula a sinalização do receptor Notch durante o desenvolvimento embrionário, particularmente na somitogênese e no estabelecimento do padrão ântero-posterior. Em camundongos, a DLL3 atua principalmente no complexo de Golgi e no retículo endoplasmático, influenciando o resultado da via Notch ao afetar o processamento do receptor e as interações entre ligantes, moldando programas transcricionais que governam decisões de destino celular. A perturbação de Dll3 desorganiza a sinalização oscilatória de Notch e a dinâmica do relógio de segmentação, levando a defeitos no padrão de vértebras e costelas e fornecendo um modelo para malformações congênitas da coluna vertebral. Como a sinalização de Notch também se cruza com diferenciação, proliferação e homeostase tecidual, estudos de perda de função de Dll3 são úteis para dissecar a comunicação entre vias em contextos relevantes para o desenvolvimento e para doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Delta-3 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Dll3 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Dll3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Dll3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Delta-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Dll3 para a investigação da sinalização de Delta-3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Dll3 críticos para a função Delta-3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Dll3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Delta-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Delta-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Dll3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Delta-3 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Delta-3 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Dll3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Dll3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.