DDX17 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401338-ACT

DDX17 (elicasi DEAD-box 17) è un’elicasi dell’RNA umana ATP-dipendente che rimodella l’RNA e i complessi ribonucleoproteici per coordinare molteplici fasi del metabolismo dell’RNA. Partecipa allo splicing del pre-mRNA, alla co-regolazione trascrizionale, alla biogenesi dei microRNA e al processamento di RNA correlato ai ribosomi, collegando l’attività di elicasi dell’RNA a programmi di espressione genica che governano proliferazione e differenziamento. La funzione di DDX17 interseca reti trascrizionali dipendenti dalla segnalazione e complessi regolatori associati alla cromatina, modellando isoforme di trascritto specifiche del contesto e la stabilità dell’RNA. La disregolazione del processamento dell’RNA e del controllo trascrizionale associati a DDX17 è stata implicata in vie oncogeniche e dello sviluppo, rendendola rilevante per studi meccanicistici sull’alterata espressione genica in modelli di malattia.

DDX17 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DDX17 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DDX17 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DDX17 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DDX17, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DDX17. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DDX17 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DDX17 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DDX17 nelle cellule tumorali con espressione di DDX17 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.