DDR2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400414-NIC

Il recettore 2 del dominio discoidin (DDR2) è una tirosin-chinasi recettoriale attivata dal collagene che collega la percezione della matrice extracellulare alla segnalazione intracellulare, regolando adesione, migrazione e proliferazione cellulare, nonché il rimodellamento della matrice. In seguito al legame con collagene fibrillare, DDR2 va incontro ad autofosforilazione e attiva vie come MAPK/ERK, PI3K–AKT, la segnalazione della famiglia SRC e regolatori del citoscheletro, influenzando le transizioni epitelio-mesenchimali e le interazioni con lo stroma. L'attività di DDR2 è strettamente legata all'omeostasi del tessuto connettivo e al turnover del collagene, e un'alterazione della segnalazione di DDR2 è stata associata al rimodellamento correlato alla fibrosi e alle dinamiche del microambiente tumorale. In quanto bersaglio umano di DDR2, è spesso studiato in modelli di segnalazione guidata dalla matrice extracellulare, comportamento invasivo e cross-talk tra tirosin-chinasi recettoriali.

DDR2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DDR2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DDR2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DDR2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DDR2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.