DDI1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-428086

Panoramica

Il DDI1 murino (DNA damage-inducible 1 homolog) codifica una proteina conservata implicata nella proteostasi dipendente dall’ubiquitina attraverso i suoi domini ubiquitin-like e ubiquitin-associated e una regione simile a una proteasi retrovirale. DDI1 è stato collegato alla regolazione del turnover proteico, all’adattamento allo stress e al crosstalk con le risposte al danno del DNA, in linea con ruoli nel mantenimento del controllo qualità delle proteine e dell’omeostasi cellulare. La perturbazione delle vie associate a DDI1 può influenzare l’accumulo di proteine ubiquitinate e gli output della segnalazione di stress, aspetti rilevanti per modelli di neurodegenerazione, biologia del cancro e risposte infiammatorie. Nei sistemi murini, DDI1 rappresenta un nodo sperimentale trattabile per studiare come le vie mediate dall’ubiquitina intersechino la stabilità del genoma e lo stress proteotossico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DDI1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ddi1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ddi1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ddi1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DDI1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ddi1 per lo studio della segnalazione di DDI1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ddi1 critici per la funzione di DDI1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ddi1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DDI1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal DDI1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ddi1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DDI1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR DDI1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ddi1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ddi1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.