DCTD Plasmide Double Nickase (h): sc-405193-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DCTD Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DCTD Double Nickase Plasmid (h) e il DCTD Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DCTD. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DCTD Antibody (F-9): sc-376659
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DCTD Plasmide Double Nickase (h) | sc-405193-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DCTD Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405193-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano DCTD codifica la deaminasi del deossicitidilato, un enzima citosolico che catalizza la deaminazione del dCMP a dUMP, fornendo una fonte chiave di dUMP per la biosintesi del timidilato e mantenendo bilanciati i pool di deossinucleotidi. Attraverso il suo ruolo nel metabolismo delle pirimidine, DCTD supporta la replicazione e la riparazione del DNA influenzando la disponibilità di dTTP e limitando lo stress replicativo. L’alterazione dell’omeostasi dei nucleotidi è una caratteristica comune delle cellule in rapida proliferazione ed è spesso associata a instabilità genomica nella biologia del cancro. DCTD rappresenta quindi un utile nodo molecolare per studiare il controllo metabolico della sintesi del DNA, la progressione del ciclo cellulare e le risposte allo stress guidate dallo squilibrio dei nucleotidi.
DCTD Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DCTD nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DCTD. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DCTD. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DCTD interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.