DC-SIGN Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401368-LAC

CD209 codifica DC-SIGN (dendritic cell-specific intercellular adhesion molecule-3-grabbing non-integrin), un recettore lectinico di tipo C fortemente espresso sulle cellule dendritiche e su specifiche popolazioni di macrofagi, in grado di riconoscere glicani ad alto contenuto di mannosio e glicani fucosilati. Attraverso il legame con i ligandi, DC-SIGN influenza il riconoscimento dei patogeni, la captazione dell’antigene, il traffico endosomiale e la formazione della sinapsi immunologica, accoppiandosi a programmi di segnalazione che includono la modulazione di NF-κB dipendente da Raf-1 e risposte trascrizionali più ampie dell’immunità innata. Questo recettore partecipa al crosstalk con le vie dei Toll-like receptor e modella la produzione di citochine, potendo orientare il priming e la polarizzazione delle cellule T a valle. Attività ed espressione deregolate di DC-SIGN sono state associate ad alterate interazioni ospite–patogeno e al rimodellamento del microambiente immunitario in modelli di malattie infettive e in contesti infiammatori.

Le particelle di attivazione lentivirale DC-SIGN (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CD209 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale DC-SIGN (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CD209, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di DC-SIGN. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CD209 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.