Daxx Plasmide Double Nickase (h): sc-400686-NIC

DAXX codifica Daxx, una proteina nucleare multifunzionale che agisce come coregolatore trascrizionale e fattore associato alla cromatina, nota soprattutto per la sua collaborazione con ATRX nel depositare la variante istonica H3.3 nell’eterocromatina ripetitiva e nelle regioni telomeriche. Attraverso interazioni con i corpi nucleari PML e con diversi fattori di trascrizione, Daxx influenza l’organizzazione della cromatina, le risposte al danno al DNA e le vie di segnalazione indotte dallo stress. Daxx è stata inoltre collegata alla regolazione dell’apoptosi e alla modulazione di programmi trascrizionali dell’immunità innata e correlati all’interferone. Una funzione o un’espressione disregolate di DAXX sono state associate ad alterazioni degli stati epigenetici e a instabilità genomica osservate in molteplici contesti patologici, inclusi cancro e fenotipi neuroevolutivi.

Daxx Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DAXX nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DAXX. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DAXX. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DAXX interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.