DAX-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402180-ACT

NR0B1 codifica DAX-1, un recettore nucleare orfano che funziona principalmente come coregolatore trascrizionale nei tessuti steroidogenici, integrando la segnalazione dei recettori nucleari con programmi di sviluppo. DAX-1 modula geni coinvolti nella differenziazione surrenalica e gonadica e nella biosintesi degli ormoni steroidei, inclusa la regolazione delle reti trascrizionali dipendenti dal fattore steroidogenico 1 (NR5A1/SF-1). Attraverso i suoi effetti sulla determinazione del destino cellulare e sull’omeostasi endocrina, DAX-1 contribuisce a controllare proliferazione e differenziamento nella corteccia surrenale e nelle linee riproduttive. La disregolazione di NR0B1 è associata all’ipoplasia surrenalica congenita legata al cromosoma X e all’ipogonadismo ipogonadotropo, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sullo sviluppo endocrino e sulla regolazione trascrizionale.

DAX-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NR0B1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DAX-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NR0B1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NR0B1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DAX-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NR0B1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DAX-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DAX-1 nelle cellule tumorali con espressione di NR0B1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.