DAP12 Plasmide Double Nickase (m): sc-423568-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DAP12 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DAP12 Double Nickase Plasmid (m) e il DAP12 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Tyrobp. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DAP12 Antibody (A-4): sc-166084
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DAP12 Plasmide Double Nickase (m) | sc-423568-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DAP12 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-423568-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Tyrobp codifica DAP12 (TYROBP), un adattatore transmembrana che contiene un motivo di attivazione basato su tirosina tipico degli immunorecettori (ITAM) e che collega molteplici recettori attivatori nelle cellule mieloidi alla segnalazione intracellulare. Nella microglia murina, nei macrofagi, nelle cellule dendritiche e nelle cellule della linea osteoclastica, DAP12 si associa a recettori come TREM2, SIRPβ1 e altri recettori di tipo Ig per promuovere cascate dipendenti da SYK che regolano fagocitosi, produzione di citochine, chemiotassi, sopravvivenza e rimodellamento del citoscheletro. Questo asse di segnalazione interseca vie dell’immunità innata, incluse le risposte mediate da FcR e la segnalazione PI3K–AKT e MAPK, modulando il tono infiammatorio e la sorveglianza tissutale. L’alterazione dell’attività della rete TYROBP/DAP12 è ampiamente studiata in contesti quali la neuroinfiammazione e le transizioni di stato della microglia, la difesa dell’ospite e i disturbi del rimodellamento osseo.
DAP12 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tyrobp nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tyrobp. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tyrobp. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tyrobp interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.