Dab1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402167-ACT

DAB1 codifica Disabled-1 (Dab1), una proteina adattatrice citoplasmatica che trasduce i segnali di Reelin per coordinare la migrazione neuronale, la laminazione corticale e la crescita dei neuriti durante lo sviluppo cerebrale. In seguito al legame di Reelin con i recettori VLDLR e LRP8 (ApoER2), Dab1 viene fosforilata su residui di tirosina e si associa a valle alle chinasi della famiglia Src e a vie di rimodellamento del citoscheletro che determinano il posizionamento cellulare e l’organizzazione sinaptica. Questo asse di segnalazione interagisce con la dinamica dell’actina, la regolazione dei microtubuli e i meccanismi di turnover proteico che influenzano la polarità e la connettività neuronale. Un’attività deregolata della via DAB1/Reelin è implicata nella biologia di patologie neuroevolutive e neuropsichiatriche, rendendo DAB1 un nodo utile per studi meccanicistici sulla formazione dei circuiti cerebrali e sui fenotipi cellulari di migrazione.

Dab1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DAB1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Dab1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DAB1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DAB1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Dab1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DAB1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Dab1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Dab1 nelle cellule tumorali con espressione di DAB1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.