DAAO Plasmide Double Nickase (h): sc-402772-NIC

Il gene umano **DAO** codifica la **D-amminoacido ossidasi (DAAO)**, una flavoproteina perossisomiale che catalizza la deaminazione ossidativa dei D-amminoacidi neutri nei corrispondenti acidi cheto, generando al contempo perossido di idrogeno. Questa attività si inserisce nel catabolismo degli amminoacidi, nell’omeostasi redox e nel metabolismo delle specie reattive dell’ossigeno associate ai perossisomi, con particolare rilevanza per la regolazione della disponibilità di **D-serina** e per il suo ruolo di co-agonista dei recettori **NMDA** nel sistema nervoso centrale. Alterazioni della funzione di DAO/DAAO sono state studiate nel contesto della biologia delle malattie neuropsichiatriche e neurodegenerative, in cui cambiamenti nel turnover della D-serina e nelle vie dello stress ossidativo possono influenzare la segnalazione sinaptica. DAO è inoltre utilizzato come nodo metabolico per studiare il traffico degli enzimi perossisomiali, la chimica ossidativa flavino-dipendente e le risposte cellulari al perossido.

DAAO Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DAO nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DAO. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DAO. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DAO interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.