D4DR Plasmide Double Nickase (h): sc-402947-NIC

DRD4 codifica il recettore della dopamina D4 (D4DR), un GPCR accoppiato a Gi/o che modula l’eccitabilità neuronale e la segnalazione sinaptica inibendo l’adenilil ciclasi e regolando finemente le vie dipendenti da cAMP/PKA. La segnalazione di D4DR interagisce con le vie MAPK/ERK e con la regolazione dei canali ionici, influenzando il rilascio di neurotrasmettitori e la plasticità dei circuiti nel sistema nervoso centrale. Varianti di DRD4 e alterazioni della segnalazione recettoriale sono state associate a fenotipi neuropsichiatrici e del neurosviluppo, inclusi tratti legati all’attenzione e al controllo degli impulsi, e vengono studiate nel contesto della disregolazione delle vie dopaminergiche. In quanto recettore di superficie cellulare con una farmacologia ben definita, D4DR rappresenta un nodo sperimentalmente accessibile per analizzare la segnalazione dopaminergica, il trafficking del recettore e le risposte trascrizionali a valle.

D4DR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DRD4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DRD4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DRD4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DRD4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.