Cytokeratin 6C Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401652-ACT

KRT6C codifica la citocheratina 6C, una proteina a filamento intermedio di tipo II che forma eterodimeri con cheratine di tipo I per costruire il citoscheletro di cheratine negli epiteli stratificati. Questa rete strutturale sostiene la resistenza meccanica, coordina il rimodellamento del citoscheletro durante la riparazione delle ferite e si interfaccia con desmosomi ed emidesmosomi per mantenere l’integrità dei tessuti. I membri della famiglia della citocheratina 6 sono comunemente associati a programmi di iperproliferazione e di risposta allo stress nei cheratinociti, con pattern di espressione delle cheratine disregolati osservati in diversi stati infiammatori cutanei e in patologie epiteliali. In quanto effettore citoscheletrico, KRT6C rappresenta uno strumento accessibile per studiare l’organizzazione dei filamenti dipendente dalla differenziazione, la biologia della barriera e la segnalazione da stress in sistemi modello epiteliali.

Cytokeratin 6C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di KRT6C senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Cytokeratin 6C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus KRT6C nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione KRT6C, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Cytokeratin 6C. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus KRT6C nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Cytokeratin 6C nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Cytokeratin 6C nelle cellule tumorali con espressione di KRT6C silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.