Cytokeratin 15 Plasmide Double Nickase (h): sc-401869-NIC

KRT15 codifica la citocheratina 15, una proteina dei filamenti intermedi di tipo I, particolarmente arricchita nei cheratinociti basali e nei compartimenti di progenitori epiteliali, dove contribuisce all’integrità del citoscheletro e alla resilienza tissutale. La citocheratina 15 partecipa all’assemblaggio dei filamenti intermedi e interagisce (“cross-talk”) con i complessi di adesione desmosomiali ed emidesmosomiali, influenzando l’adesione cellula-cellula, la polarità e i programmi di migrazione. Nella cute e negli epiteli stratificati, l’espressione di KRT15 è comunemente utilizzata per studiare la dinamica delle cellule staminali, la differenziazione epidermica e i processi di riparazione delle ferite. Reti di cheratine deregolate, incluse alterazioni dei pattern di espressione di KRT15, sono associate a risposte di stress epiteliale e sono state investigate in contesti di iperproliferazione, infiammazione e biologia tumorale.

Cytokeratin 15 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KRT15 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KRT15. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KRT15. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KRT15 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.