cytoglobin Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402949-LAC

Il gene umano **CYGB** codifica la **citoglobina**, una globina esacoordinata espressa in molteplici tessuti, che lega ossigeno e ossido nitrico e contribuisce all’equilibrio redox. La citoglobina partecipa alle risposte cellulari all’ipossia e allo stress ossidativo modulando la gestione delle specie reattive dell’ossigeno e la biodisponibilità dell’ossido nitrico, influenzando la funzione mitocondriale e programmi trascrizionali adattativi allo stress. Un’alterata espressione di **CYGB** è stata riportata in contesti di rimodellamento tissutale e fibrosi, disfunzione vascolare e biologia tumorale, nei quali la citoglobina è stata associata a cambiamenti nella sopravvivenza cellulare, nel metabolismo e nella segnalazione della matrice extracellulare. Queste proprietà rendono **CYGB** un bersaglio utile per analizzare vie di sensing dell’ossigeno, pathway regolati dal redox e risposte allo stress in modelli cellulari fisiologicamente rilevanti.

Le particelle di attivazione lentivirale cytoglobin (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CYGB in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale cytoglobin (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CYGB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di cytoglobin. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CYGB e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.