cytochrome b5 Plasmide Double Nickase (m): sc-430951-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- cytochrome b5 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il cytochrome b5 Double Nickase Plasmid (m) e il cytochrome b5 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Cyb5a. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
cytochrome b5 Plasmide Double Nickase (m) | sc-430951-NIC | 20 µg | $410.00 |
Nel topo, **Cyb5a** codifica il citocromo b5, una proteina eme associata alla membrana che trasferisce elettroni agli enzimi del citocromo P450, alle desaturasi degli acidi grassi e ai sistemi di elongazione nel reticolo endoplasmatico. Attraverso queste interazioni, il citocromo b5 sostiene il metabolismo ossidativo di xenobiotici e substrati endogeni, la biosintesi di steroidi e lipidi e l’omeostasi redox. L’attività di **Cyb5a** può influenzare le risposte cellulari allo stress ossidativo e la gestione metabolica di farmaci e ormoni, collegandosi a vie rilevanti per la funzione epatica e l’equilibrio lipidico sistemico. Un’alterata trasmissione di elettroni dipendente dal citocromo b5 è stata associata a una disregolazione del metabolismo lipidico e a perturbazioni dell’ossidazione mediata da P450, rendendo **Cyb5a** un nodo utile per studi meccanicistici in modelli metabolici e tossicologici.
cytochrome b5 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cyb5a nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cyb5a. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cyb5a. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cyb5a interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.