cystatin C Plasmide Double Nickase (h): sc-402420-NIC

CST3 codifica la cistatina C, una cistatina secreta di tipo 2 che inibisce potentemente le proteasi cisteiniche lisosomiali ed extracellulari, come le catepsine, limitando così la proteolisi nel rimodellamento tissutale, nella processazione dell’antigene e nei microambienti infiammatori. Bilanciando l’attività delle catepsine, la cistatina C contribuisce a regolare il turnover della matrice extracellulare, la migrazione cellulare e le reti di proteasi endo-lisosomiali legate alla segnalazione immunitaria e all’omeostasi cellulare. Alterazioni dell’espressione di CST3 o dell’abbondanza di cistatina C sono state associate a processi neurodegenerativi, a patologie correlate all’amiloide e ad aspetti della biologia vascolare e renale, rendendola un indicatore molecolare ampiamente utilizzato negli studi su proteostasi e funzione di barriera. Queste caratteristiche rendono CST3 un nodo utile per interrogare l’equilibrio proteasi–antiproteasi nel SNC e nei sistemi periferici.

cystatin C Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CST3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CST3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CST3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CST3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.