CysLT₁ Receptor Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416516-ACT

CYSLTR1 codifica il recettore umano dei leucotrieni cisteinilici 1 (recettore CysLT1), un recettore accoppiato a proteine G che lega LTC4, LTD4 ed LTE4 per trasdurre i segnali dei mediatori lipidici dell’infiammazione. Una volta attivato, si accoppia principalmente a Gq/11 per stimolare la segnalazione della fosfolipasi C, la mobilizzazione del Ca2+ intracellulare e i programmi trascrizionali a valle collegati a MAPK e NF-κB, che regolano chemiotassi, permeabilità vascolare e contrattilità della muscolatura liscia. L’attività di CYSLTR1 interseca le vie di biosintesi dell’acido arachidonico/leucotrieni e modella la comunicazione tra leucociti e stroma all’interno dei tessuti infiammati. Una segnalazione deregolata del recettore CysLT1 è stata associata a infiammazione e rimodellamento delle vie aeree, risposte allergiche e patologie immuno-mediate più ampie, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico nella ricerca sull’infiammazione.

CysLT1 Receptor Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CYSLTR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CysLT1 Receptor Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CYSLTR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CYSLTR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CysLT1 Receptor. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CYSLTR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CysLT1 Receptor nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CysLT1 Receptor nelle cellule tumorali con espressione di CYSLTR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.