Cyr61/CCN1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400366-NIC

CYR61 (Cyr61/CCN1) codifica una proteina matricellulare secreta della famiglia CCN che integra i segnali della matrice extracellulare con i recettori di superficie cellulare per regolare adesione, migrazione, proliferazione e sopravvivenza. Cyr61/CCN1 attiva segnali dipendenti da integrine ed eparan solfato e modula vie a valle che includono adesioni focali/FAK, MAPK/ERK e PI3K/AKT, collegando input meccanici e infiammatori del microambiente a programmi di espressione genica. Nei tessuti umani, un'espressione alterata di CYR61 è associata ad angiogenesi, riparazione delle ferite, fibrosi e interazioni tumore–stroma, rendendolo rilevante per lo studio del rimodellamento della matrice extracellulare e della segnalazione dipendente dal contesto. Queste caratteristiche ne supportano l'utilizzo come nodo per investigare la comunicazione cellula–matrice, le risposte endoteliali e le reti trascrizionali indotte da stress.

Cyr61/CCN1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CYR61 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CYR61. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CYR61. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CYR61 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.