Plásmido CRISPR de Activación (h) CyPB: sc-401888-ACT

PPIB codifica la ciclofilina B (CyPB), una isomerasa peptidil-prolil cis-trans localizada en el retículo endoplásmico que acelera el plegamiento de proteínas y contribuye a la proteostasis de la vía secretora. CyPB participa en el control de calidad del RE y en las respuestas al estrés, incluida la coordinación de redes de chaperonas y la modulación de procesos dependientes de calcio que influyen en la homeostasis celular. A través de su actividad isomerasa y de sus interacciones con sustratos en plegamiento, PPIB conecta la maduración proteica con vías que regulan la producción de matriz extracelular, la señalización inflamatoria y las decisiones de supervivencia celular. La desregulación de la actividad o la expresión de PPIB/CyPB se ha asociado con contextos patológicos que implican manejo aberrante de proteínas, activación inmunitaria y remodelación tisular, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos en modelos de enfermedad.

CyPB El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PPIB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CyPB El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PPIB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PPIB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CyPB. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PPIB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CyPB en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CyPB en células tumorales con expresión de PPIB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.