CyPB Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401888-ACT

PPIB codifica la ciclofilina B (CyPB), un’isomerasi peptidil-prolil cis-trans localizzata nel reticolo endoplasmatico che accelera il ripiegamento delle proteine e sostiene la proteostasi della via secretoria. CyPB partecipa al controllo qualità del RE e alle risposte allo stress, inclusi il coordinamento delle reti di chaperoni e la modulazione di processi calcio-dipendenti che influenzano l’omeostasi cellulare. Attraverso la sua attività isomerasica e le interazioni con i substrati di ripiegamento, PPIB collega la maturazione proteica a vie che regolano la produzione di matrice extracellulare, la segnalazione infiammatoria e le decisioni di sopravvivenza cellulare. Un’attività o un’espressione deregolata di PPIB/CyPB è stata associata a contesti patologici caratterizzati da gestione anomala delle proteine, attivazione immunitaria e rimodellamento tissutale, rendendola rilevante per studi meccanicistici in modelli di malattia.

CyPB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PPIB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CyPB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PPIB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PPIB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CyPB. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PPIB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CyPB nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CyPB nelle cellule tumorali con espressione di PPIB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.