CYP8B1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403383-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CYP8B1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CYP8B1 Double Nickase Plasmid (h) e il CYP8B1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CYP8B1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CYP8B1 Antibody (M15-P3B7): sc-101387
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CYP8B1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403383-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP8B1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403383-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYP8B1 codifica la sterol 12α-idrossilasi, un enzima microsomiale del citocromo P450 che catalizza una fase chiave di idrossilazione nella via classica di biosintesi degli acidi biliari, influenzando il rapporto tra acido colico e acido chenodesossicolico. Attraverso questa attività, CYP8B1 contribuisce a determinare il pool epatico di acidi biliari, con effetti sulla circolazione enteroepatica, sull’assorbimento dei lipidi e sulla segnalazione metabolica mediata da recettori nucleari e vie GPCR sensibili agli acidi biliari, come FXR e TGR5. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di CYP8B1 sono state associate a una composizione degli acidi biliari deregolata e a fenotipi metabolici più ampi, rilevanti per la ricerca epatica e cardiometabolica. CYP8B1 rappresenta quindi un bersaglio utile per studi meccanicistici sul metabolismo epatico, sulle reti di segnalazione degli acidi biliari e sulle interazioni gene–ambiente negli epatociti e in sistemi modello pertinenti.
CYP8B1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CYP8B1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CYP8B1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CYP8B1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CYP8B1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.