CYP8B1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403383

Panoramica

CYP8B1 codifica un enzima del citocromo P450 localizzato nel reticolo endoplasmatico che catalizza la 12α-idrossilazione degli intermedi degli acidi biliari, un determinante chiave della produzione di acido colico e del rapporto acido colico/acido chenodesossicolico. Controllando la composizione degli acidi biliari, CYP8B1 influenza la segnalazione enteroepatica tramite FXR e TGR5, modulando il metabolismo epatico dei lipidi e del glucosio e, più in generale, l’omeostasi degli steroli. Un’alterazione dell’attività di CYP8B1 è associata a pool di acidi biliari deregolati osservati nella malattia epatica metabolica, negli stati colestatici e in condizioni che influenzano la gestione del colesterolo. Ciò rende CYP8B1 un nodo utile per analizzare i programmi trascrizionali guidati dagli acidi biliari e il crosstalk tra epatociti e segnalazione intestinale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP8B1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CYP8B1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CYP8B1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CYP8B1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CYP8B1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CYP8B1 per lo studio della segnalazione di CYP8B1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CYP8B1 critici per la funzione di CYP8B1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CYP8B1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CYP8B1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CYP8B1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CYP8B1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CYP8B1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CYP8B1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CYP8B1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CYP8B1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.