CYP51A1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419931

Panoramica

Il gene murino **Cyp51** codifica l’enzima del citocromo P450 **CYP51A1** (lanosterolo 14α-demethylasi), una monoossigenasi conservata che catalizza una fase chiave della via biosintetica del mevalonato/degli steroli post-squalene che porta al colesterolo e ad altri steroli. Controllando il flusso degli intermedi sterolici, CYP51A1 influenza la composizione delle membrane, la segnalazione dipendente dalle lipid rafts e la disponibilità di metaboliti derivati dagli steroli che modulano l’omeostasi cellulare. L’alterazione della biosintesi degli steroli è associata a cambiamenti nella proliferazione, nella differenziazione e nelle risposte allo stress, rendendo **Cyp51** un nodo utile per studiare il rimodellamento metabolico e i requisiti lipidici specifici dei diversi organi. Nei modelli murini, la manipolazione di **Cyp51** consente di indagare i meccanismi di regolazione della via del colesterolo e il suo contributo a fenotipi di sviluppo e metabolici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP51A1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cyp51 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cyp51 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cyp51 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CYP51A1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cyp51 per lo studio della segnalazione di CYP51A1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cyp51 critici per la funzione di CYP51A1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cyp51 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CYP51A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CYP51A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cyp51. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CYP51A1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CYP51A1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cyp51 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cyp51 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.