CYP4A10 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419927-ACT

Il gene murino **Cyp4a10** codifica l’enzima del citocromo P450 **CYP4A10**, un’ω-idrossilasi microsomiale degli acidi grassi che catalizza il metabolismo di acidi grassi a media e lunga catena, inclusa la conversione dell’acido arachidonico in eicosanoidi bioattivi come il **20-HETE**. Attraverso queste reazioni, CYP4A10 contribuisce all’omeostasi lipidica e all’equilibrio redox e può influenzare reti di segnalazione legate alla regolazione dei recettori attivati dai proliferatori dei perossisomi (**PPAR**), al trasporto tubulare renale e al tono vascolare. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di Cyp4a10 sono state associate a profili di eicosanoidi deregolati e a effetti a valle sul controllo della pressione arteriosa, sulla fisiologia renale e sulle risposte infiammatorie. Di conseguenza, questo gene è spesso studiato in modelli di stress metabolico e in vie che collegano l’ossidazione lipidica a fenotipi cardio-renali.

CYP4A10 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Cyp4a10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CYP4A10 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Cyp4a10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Cyp4a10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CYP4A10. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Cyp4a10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CYP4A10 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CYP4A10 nelle cellule tumorali con espressione di Cyp4a10 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.