CYP2J2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402955

Panoramica

CYP2J2 codifica una monoossigenasi del citocromo P450 microsomiale che catalizza l’ossidazione NADPH-dipendente di lipidi endogeni e xenobiotici, con una marcata attività epossigenasica nei confronti dell’acido arachidonico, generando acidi epossieicosatrienoici (EET). Questi metaboliti contribuiscono alla regolazione del tono vascolare, della segnalazione infiammatoria, della proliferazione cellulare e delle risposte allo stress ossidativo, collegando l’attività di CYP2J2 alle vie degli eicosanoidi e dei mediatori lipidici. L’espressione di CYP2J2 in tessuti cardiovascolari ed extraepatici supporta ruoli nella funzione endoteliale e nell’omeostasi metabolica, e alterazioni dell’espressione o dell’attività sono state associate a fenotipi cardiometabolici e infiammatori. In biologia del cancro, la segnalazione lipidica dipendente da CYP2J2 è stata studiata in relazione alla sopravvivenza e migrazione delle cellule tumorali e al crosstalk con il microambiente, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP2J2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CYP2J2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CYP2J2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CYP2J2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CYP2J2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CYP2J2 per lo studio della segnalazione di CYP2J2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CYP2J2 critici per la funzione di CYP2J2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CYP2J2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CYP2J2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CYP2J2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CYP2J2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CYP2J2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CYP2J2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CYP2J2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CYP2J2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.