CYP2F1 Plasmide Double Nickase (h): sc-404064-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CYP2F1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CYP2F1 Double Nickase Plasmid (h) e il CYP2F1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CYP2F1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CYP2F1 Antibody (E-10): sc-377499
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CYP2F1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404064-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP2F1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404064-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYP2F1 codifica una monoossigenasi del citocromo P450 che catalizza il metabolismo ossidativo di substrati endogeni e xenobiotici, contribuendo alle reazioni cellulari di detossificazione e bioattivazione. Come parte del sistema redox dei P450, CYP2F1 accoppia il trasferimento di elettroni dall’NADPH tramite la citocromo P450 reduttasi per sostenere reazioni di ossigenazione che possono influenzare lo stress ossidativo, la formazione di elettrofili e le risposte di segnalazione a valle. L’attività di CYP2F1 è rilevante per la biologia delle vie aeree e del polmone, dove l’attivazione metabolica di alcuni composti inalati può incidere sulle risposte di danno epiteliale e sui processi infiammatori. Una regolazione alterata di CYP2F1 è stata studiata nel contesto della variabilità interindividuale nel metabolismo degli xenobiotici e della suscettibilità al danno tissutale indotto da agenti chimici.
CYP2F1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CYP2F1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CYP2F1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CYP2F1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CYP2F1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.