CYP26B1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403610

Panoramica

CYP26B1 codifica una retinoic acid idrossilasi del citocromo P450 che catalizza il catabolismo ossidativo dell’acido all-trans-retinoico e di retinoidi correlati, controllando così i gradienti intracellulari di retinoidi. Modulando la disponibilità dell’acido retinoico, CYP26B1 influenza programmi trascrizionali dipendenti dai recettori dell’AR (RAR/RXR) che regolano differenziamento, morfogenesi e omeostasi tissutale. La sua attività interseca reti di segnalazione dello sviluppo e decisioni sul destino cellulare attraverso il metabolismo dei retinoidi e le conseguenti vie di regolazione genica. Un’espressione o una funzione deregolata di CYP26B1 è stata implicata in fenotipi congeniti dello sviluppo e in contesti di segnalazione dei retinoidi alterata rilevanti per la biologia del cancro e per processi infiammatori, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici dell’omeostasi dei retinoidi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP26B1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CYP26B1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CYP26B1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CYP26B1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CYP26B1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CYP26B1 per lo studio della segnalazione di CYP26B1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CYP26B1 critici per la funzione di CYP26B1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CYP26B1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CYP26B1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CYP26B1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CYP26B1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CYP26B1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CYP26B1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CYP26B1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CYP26B1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.