CYP26A1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402832-NIC

CYP26A1 codifica una monoossigenasi del citocromo P450 che catalizza il metabolismo ossidativo dell’acido retinoico tutto-trans, modellando così i gradienti intracellulari di retinoidi e controllando l’intensità e la durata della segnalazione dei recettori dell’acido retinoico (RAR/RXR). Regolando la disponibilità di acido retinoico, CYP26A1 influenza programmi trascrizionali coinvolti nel patterning embrionale, nella differenziazione epiteliale e nell’omeostasi tissutale. L’attività di CYP26A1 è collegata alle vie metaboliche dei retinoidi e al cross-talk con reti di sviluppo e sensibili agli ormoni che influenzano le decisioni sul destino cellulare. Un’espressione o una funzione deregolata di CYP26A1 può alterare la segnalazione dei retinoidi ed è stata associata ad anomalie dello sviluppo e a stati di differenziazione modificati, rilevanti per il cancro e per altre condizioni sensibili ai retinoidi.

CYP26A1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CYP26A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CYP26A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CYP26A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CYP26A1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.