CYP1A2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401178-NIC

CYP1A2 codifica una monoossigenasi epatica del citocromo P450 che catalizza il metabolismo ossidativo di composti endogeni e di molti xenobiotici, inclusa la caffeina e altri substrati aromatici. Nell’ambito del metabolismo dei farmaci di Fase I, l’attività di CYP1A2 modella i processi di bioattivazione e di eliminazione generando metaboliti più polari e intermedi reattivi, che possono influenzare lo stress ossidativo e l’omeostasi redox cellulare. La sua espressione è regolata da programmi trascrizionali di sensing degli xenobiotici, in particolare dalla segnalazione mediata dal recettore degli idrocarburi arilici (AHR), collegando le esposizioni ambientali alla riprogrammazione metabolica. La variabilità interindividuale nella funzione e nella regolazione di CYP1A2 è ampiamente studiata per il suo impatto sui fenotipi farmacocinetici, sulla suscettibilità a sostanze chimiche e sulla biologia epatica associata al metabolismo.

CYP1A2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CYP1A2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CYP1A2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CYP1A2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CYP1A2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.