CYP19 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400604-LAC

Il gene umano **CYP19A1** codifica l’aromatasi (CYP19), un enzima del citocromo P450 localizzato nel reticolo endoplasmatico che catalizza la fase finale della biosintesi degli estrogeni convertendo gli androgeni in estrogeni. Attraverso il controllo della produzione locale e sistemica di estradiolo, **CYP19A1** modula reti di segnalazione degli ormoni steroidei che influenzano la biologia riproduttiva, la funzione del tessuto adiposo, l’omeostasi ossea e la regolazione neuroendocrina. La sua attività si integra con le vie steroidogeniche e con la regolazione a feedback lungo l’asse ipotalamo–ipofisi–gonadi, plasmando programmi trascrizionali mediati dai recettori degli estrogeni. Un’espressione alterata di **CYP19A1** o una deregolazione dell’attività dell’aromatasi è implicata in fenotipi ormono-dipendenti ed è frequentemente studiata in contesti quali la biologia dei tumori della mammella e dell’endometrio, la sindrome dell’ovaio policistico e le sindromi da eccesso o da deficit di aromatasi.

Le particelle di attivazione lentivirale CYP19 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CYP19A1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CYP19 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CYP19A1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CYP19. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CYP19A1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.