CYP11B2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405281-ACT

CYP11B2はアルドステロン合成酵素（ミトコンドリア局在のシトクロムP450酵素）をコードし、デオキシコルチコステロンからアルドステロンが生合成される過程における最終的な酸化段階を触媒します。このステロイド産生活性は、コレステロール代謝、ミトコンドリアのレドックス電子伝達、副腎皮質球状層のシグナル伝達を統合し、電解質恒常性を内分泌制御と結び付けています。CYP11B2の発現は、アンジオテンシンII、カリウム、ならびにcAMP依存性経路によって厳密に制御され、ステロイド生成の急性調節（StAR）に関わる過程や転写プログラムが調節されます。CYP11B2の活性または発現の破綻は、鉱質コルチコイド産生の変化と関連し、副腎ステロイド産生、高血圧に関連する内分泌表現型、そして副腎腫瘍の研究モデルの文脈で頻繁に検討されています。

CYP11B2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CYP11B2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CYP11B2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CYP11B2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCYP11B2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CYP11B2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCYP11B2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCYP11B2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCYP11B2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCYP11B2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。