CYFIP2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-429445

Panoramica

Cyfip2 codifica CYFIP2, un effettore citoplasmatico che collega la segnalazione di Rac1 al rimodellamento del citoscheletro di actina e al controllo della traduzione attraverso interazioni con il complesso regolatorio WAVE e con assemblaggi ribonucleoproteici associati a FMRP. Nei neuroni, CYFIP2 contribuisce alla dinamica del cono di crescita, alla maturazione delle spine dendritiche e alla plasticità sinaptica coordinando la polimerizzazione dell’actina guidata da Arp2/3 con la sintesi proteica dipendente dall’attività. Questi processi collocano CYFIP2 all’interfaccia tra organizzazione del citoscheletro e metabolismo dell’RNA, collegandolo a vie coinvolte nella connettività neuronale e nella funzione delle sinapsi eccitatorie. Un’alterata attività di CYFIP2 è stata associata, in studi genetici e funzionali, a fenotipi del neurosviluppo e a una suscettibilità correlata alle crisi epilettiche, a supporto della sua rilevanza per la modellizzazione meccanicistica in sistemi murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CYFIP2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cyfip2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cyfip2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cyfip2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CYFIP2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cyfip2 per lo studio della segnalazione di CYFIP2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cyfip2 critici per la funzione di CYFIP2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cyfip2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CYFIP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CYFIP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cyfip2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CYFIP2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CYFIP2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cyfip2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cyfip2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.