Cyclophilin F Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402902-ACT

PPIF codifica la ciclofilina F umana, una peptidil-prolil cis-trans isomerasi mitocondriale che contribuisce al ripiegamento proteico e al controllo di qualità all’interno della matrice mitocondriale e dell’ambiente della membrana interna. La ciclofilina F partecipa alla regolazione della transizione di permeabilità mitocondriale e influenza l’omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno, collegandosi così alle risposte allo stress cellulare, alla bioenergetica e alla segnalazione apoptotica. Per queste funzioni, l’attività di PPIF viene spesso studiata in contesti di disfunzione mitocondriale, in cui un’alterata transizione di permeabilità e uno squilibrio redox sono associati a neurodegenerazione, modelli di danno da ischemia-riperfusione e meccanismi di malattie metaboliche. PPIF funge anche da nodo per analizzare come enzimi di ripiegamento di tipo chaperone modulino la proteostasi e la segnalazione mitocondriale in condizioni di stress infiammatorio o ossidativo.

Cyclophilin F Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PPIF senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Cyclophilin F Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PPIF nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PPIF, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Cyclophilin F. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PPIF nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Cyclophilin F nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Cyclophilin F nelle cellule tumorali con espressione di PPIF silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.