Cyclophilin 40 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-426720
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Cyclophilin 40 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Cyclophilin 40, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Cyclophilin 40 Antibody (C-11): sc-137216
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Cyclophilin 40 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-426720 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Ppid codifica per la ciclofilina 40 (Cyp40), un’isomerasi peptidil-prolil cis–trans che funge da co-chaperone con dominio TPR all’interno dei complessi HSP90/HSP70. Facilitando la maturazione conformazionale e l’assemblaggio delle proteine “client”, Cyp40 influenza la proteostasi, la segnalazione dei recettori steroidei e le vie di risposta allo stress legate al ripiegamento proteico e al controllo qualità. Ppid è stato inoltre associato alla regolazione della gestione delle proteine mitocondriali e della suscettibilità all’apoptosi attraverso meccanismi dipendenti dalle chaperoni. La disregolazione delle reti chaperone–immunofiline è spesso studiata nei contesti di neurodegenerazione, infiammazione e stress del proteoma associato al cancro, rendendo Ppid un nodo utile per indagini meccanicistiche nei sistemi murini.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Cyclophilin 40 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ppid in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ppid insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ppid a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Cyclophilin 40.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ppid per lo studio della segnalazione di Cyclophilin 40, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Ppid critici per la funzione di Cyclophilin 40
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ppid per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Cyclophilin 40 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Cyclophilin 40 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ppid. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Cyclophilin 40 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Cyclophilin 40 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ppid per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ppid definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.