cyclin Y Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-426856

Panoramica

Il gene murino **Ccny** codifica la ciclina Y, una ciclina associata alla membrana che coordina la segnalazione legata al ciclo cellulare con programmi di sviluppo e metabolici. La ciclina Y è stata implicata nella regolazione dell’attività delle CDK e nel facilitare la modulazione della via Wnt/β-catenina attraverso il controllo di componenti di segnalazione a livello della membrana plasmatica, influenzando proliferazione, differenziamento e omeostasi tissutale. L’espressione di **Ccny** e la dinamica della segnalazione guidata dalle cicline vengono studiate in contesti quali il comportamento di cellule staminali/progenitrici, lo sviluppo neuronale e il rimodellamento tissutale, dove un controllo del ciclo cellulare deregolato e un’alterata segnalazione Wnt sono caratteristiche comuni. Di conseguenza, i modelli di perdita di funzione di **Ccny** sono utili per analizzare la regolazione dei checkpoint dipendenti dalle cicline, il crosstalk tra vie di segnalazione e fenotipi rilevanti per la biologia dei tumori e la ricerca neuroevolutiva.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO cyclin Y (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ccny in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ccny insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ccny a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina cyclin Y.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ccny per lo studio della segnalazione di cyclin Y, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ccny critici per la funzione di cyclin Y
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ccny per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal cyclin Y CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal cyclin Y CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ccny. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal cyclin Y Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR cyclin Y (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ccny per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ccny definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.