cyclin M1 Plasmide Double Nickase (m): sc-429932-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- cyclin M1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il cyclin M1 Double Nickase Plasmid (m) e il cyclin M1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Cnnm1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
cyclin M1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-429932-NIC | 20 µg | $410.00 |
Cnnm1 codifica la ciclina M1, un regolatore conservato associato alla membrana del trasporto di cationi bivalenti, che contribuisce all’omeostasi del magnesio cellulare e alla segnalazione dipendente dagli ioni. Attraverso il controllo dei livelli intracellulari di Mg²⁺, la ciclina M1 può influenzare l’attività enzimatica ATP-dipendente, la segnalazione mediata da chinasi e i processi metabolici sensibili alla disponibilità di magnesio. Nei sistemi murini, la funzione di Cnnm1 è rilevante per studi sulla gestione degli elettroliti e sulle risposte allo stress cellulare, e un’alterazione dell’equilibrio dei cationi è stata associata a fenotipi che interessano i tessuti eccitabili e la fisiologia renale. Queste caratteristiche rendono Cnnm1 un bersaglio utile per analizzare le vie di trasporto ionico e le reti di segnalazione a valle in modelli di ricerca biomedica.
cyclin M1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cnnm1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cnnm1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cnnm1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cnnm1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.