cyclin G1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402045-ACT

CCNG1 codifica la ciclina G1, una ciclina atipica che integra la segnalazione dello stress con il controllo del ciclo cellulare e la regolazione trascrizionale. La ciclina G1 è strettamente associata alle risposte al danno al DNA dipendenti da p53, modulando il comportamento dei checkpoint e influenzando proliferazione, apoptosi e omeostasi cellulare attraverso interazioni con complessi fosfatasici e circuiti regolatori associati all’ubiquitina. Un’alterazione dell’espressione di CCNG1 è stata riportata in molteplici contesti tumorali ed è spesso studiata come nodo di collegamento tra stress genotossico, controllo della crescita e rimodellamento delle vie oncogeniche. In quanto regolatore umano del ciclo cellulare sensibile a segnali ambientali e intracellulari, la ciclina G1 rappresenta un bersaglio maneggevole per analizzare il crosstalk tra riparazione del DNA, segnalazione dei checkpoint e programmi trascrizionali adattativi.

cyclin G1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CCNG1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

cyclin G1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CCNG1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CCNG1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di cyclin G1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CCNG1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da cyclin G1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via cyclin G1 nelle cellule tumorali con espressione di CCNG1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.