cyclin E Plasmide Double Nickase (m): sc-419512-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- cyclin E Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il cyclin E Double Nickase Plasmid (m) e il cyclin E Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ccne1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: cyclin E Antibody (E-4): sc-377100
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
cyclin E Plasmide Double Nickase (m) | sc-419512-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Ccne1 codifica la ciclina E, un regolatore fondamentale della transizione G1/S che attiva CDK2 per avviare la replicazione del DNA e coordinare la duplicazione dei centrosomi. La ciclina E integra i segnali mitogenici con il controllo dei checkpoint del ciclo cellulare, influenzando l’attivazione delle origini di replicazione, l’ingresso in fase S e la stabilità del genoma attraverso vie quali RB–E2F e le reti degli inibitori delle CDK. Un’attività della ciclina E deregolata è associata a stress replicativo, instabilità cromosomica e proliferazione aberrante, rendendo Ccne1 un nodo ampiamente utilizzato per studiare il controllo del ciclo cellulare in modelli di sviluppo e di rilevanza patologica. Nei sistemi murini, la perturbazione di Ccne1 consente analisi meccanicistiche della dinamica proliferativa, delle risposte ai checkpoint e della segnalazione del danno al DNA.
cyclin E Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ccne1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ccne1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ccne1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ccne1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.