CXXC5 Plasmide Double Nickase (h): sc-403248-NIC

CXXC5 (proteina 5 con dito di zinco di tipo CXXC) è un regolatore nucleare e citoplasmatico che si lega al DNA ricco di CpG e interagisce con complessi associati alla cromatina per modulare i programmi trascrizionali. Agisce come inibitore a feedback della segnalazione Wnt/β-catenina canonica attraverso l’interazione con Dishevelled, influenzando così le decisioni sul destino cellulare, la proliferazione e la differenziazione. CXXC5 è stata inoltre collegata a vie di risposta allo stress e alla regolazione dei programmi di identità cellulare, rendendola rilevante per studi di biologia dello sviluppo e dell’omeostasi tissutale. Un’espressione o una segnalazione deregolata di CXXC5 è stata associata ad alterazioni degli output della via Wnt osservate nel cancro e in altri disturbi proliferativi, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico nella ricerca focalizzata sulle vie di segnalazione.

CXXC5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CXXC5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CXXC5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CXXC5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CXXC5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.