CXCL16 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425819

Panoramica

Cxcl16 codifica CXCL16, una chemochina transmembrana che può essere rilasciata per via proteolitica generando un ligando solubile per CXCR6, coordinando il reclutamento chemotattico e la ritenzione di cellule T attivate, cellule NK T e altri sottogruppi di leucociti. CXCL16 partecipa a reti di segnalazione infiammatoria che plasmano la sorveglianza immunitaria tissutale, l’adesione leucocitaria e il crosstalk guidato da citochine all’interno dei microambienti vascolari e parenchimali. Nei modelli murini, la segnalazione CXCL16/CXCR6 è stata collegata a processi quali l’infiammazione aterosclerotica, il traffico di cellule immunitarie nel fegato e nel polmone e le interazioni tumore–sistema immunitario, rendendola rilevante per studi sull’infiammazione cronica e sulla patologia immunomediata. La sua regolazione si interseca con programmi infiammatori associati a NF-κB e con vie di shedding dell’ectodominio che controllano l’equilibrio tra l’attività della chemochina legata alla membrana e quella solubile.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CXCL16 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cxcl16 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cxcl16 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cxcl16 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CXCL16.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cxcl16 per lo studio della segnalazione di CXCL16, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cxcl16 critici per la funzione di CXCL16
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cxcl16 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CXCL16 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CXCL16 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cxcl16. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CXCL16 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CXCL16 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cxcl16 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cxcl16 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.