CTR9 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423522

Panoramica

Il gene murino **Ctr9** codifica **CTR9**, una subunità centrale del complesso **PAF1** (Polymerase-Associated Factor 1 complex, PAF1C), che coordina l’allungamento della trascrizione da parte della **RNA polimerasi II** con la regolazione della cromatina. CTR9 sostiene modificazioni istoniche accoppiate alla trascrizione, come la metilazione di **H3K4** e **H3K36**, influenzando la pausa prossimale al promotore, il processamento dell’mRNA e il mantenimento dei programmi di identità cellulare. Attraverso questi ruoli, CTR9 incide su vie che regolano proliferazione, differenziamento e stabilità genomica, e un’attività alterata di PAF1C è stata associata a reti trascrizionali deregolate rilevanti per la biologia del cancro e per fenotipi dello sviluppo. La perturbazione di **Ctr9** rappresenta quindi un punto di accesso gestibile per studiare il controllo epigenetico dell’espressione genica e l’omeostasi trascrizionale nelle cellule dei mammiferi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CTR9 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ctr9 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ctr9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ctr9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CTR9.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ctr9 per lo studio della segnalazione di CTR9, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ctr9 critici per la funzione di CTR9
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ctr9 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CTR9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CTR9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ctr9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CTR9 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CTR9 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ctr9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ctr9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.